眾所周知，大部分生物制劑是不經(jīng)過胃腸道直接進(jìn)入體內(nèi)，所以除了生物活性外，相關(guān)部門對藥品中雜質(zhì)的*非常嚴(yán)格。其中，宿主細(xì)胞殘留DNA因?yàn)榫哂刑貏e的潛在安全風(fēng)險，一直是監(jiān)管機(jī)構(gòu)關(guān)注的重點(diǎn)。
生物制品中的重組蛋白藥、抗體藥、疫苗等產(chǎn)品是用連續(xù)傳代的動物細(xì)胞株表達(dá)生產(chǎn)，雖然經(jīng)過嚴(yán)格的純化工藝，但產(chǎn)品中仍有可能殘余宿主細(xì)胞DNA。這些殘余DNA可能帶來傳染性或致瘤性風(fēng)險，比如殘留DNA可能攜帶HIV病毒或Ras癌基因。
宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的目的：
1、確認(rèn)純化工藝合理，能有效去除宿主DNA殘余。
2、確認(rèn)產(chǎn)品中雜質(zhì)含量符合標(biāo)準(zhǔn)要求。非特異性的DNA檢測結(jié)果不能區(qū)分究竟是生產(chǎn)中污染、檢測污染、或是工藝缺陷引起的DNA殘余，就無法為解決方案提供有效信息。在嚴(yán)格的生產(chǎn)體系中，殘留DNA檢測是解決工藝合理性問題，任何外源污染問題都?xì)wSOP或GMP管理體系解決。
3、6pg/樣品的水平（目前qPCR法靈敏度可達(dá)10fg），但是技術(shù)上限制，要求待測宿主細(xì)胞殘留DNA分別不能小于50、150、600bp才能用于雜交法、q-PCR法、閾值法檢測，而WHO和FDA可接受的DNA限度內(nèi)的片段長度<200bp。
實(shí)時定量PCR法檢測殘留DNA的原理和方法：
熒光定量PCR是基于PCR擴(kuò)增時，在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，產(chǎn)物的增加可以通過熒光信號指示，通過實(shí)時監(jiān)控PCR體系中的熒光信號，對樣本中初始模板進(jìn)行定量分析。
定量PCR可實(shí)時檢測產(chǎn)物量，通過加入已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后根據(jù)待測樣品在標(biāo)準(zhǔn)曲線中的位置推算初始模板的濃度，從而達(dá)到檢測宿主細(xì)胞殘留DNA含量的目的。
